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蛋白质显色反应的原理

蛋白质测定的显色原理 

蛋白质测定的显色原理主要包括以下几种:

1. 茚三酮显色反应:该反应分为两步,第一步是氨基酸被氧化脱氨形成酮酸,酮酸脱羧成醛,放出CO2、NH3,水合茚三酮被还原成还原型茚三酮;第二步是所形成的还原型茚三酮同另一个水合茚三酮分子和氨缩合生成有蓝色物质。

2. 硝酸显色反应:含有苯环的氨基酸,如酪氨酸、色氨酸,遇硝酸后,可被硝化成黄色物质,该化合物在碱性溶液中进一步形成深橙色的硝醌酸钠。

3. 考马斯亮蓝反应:考马斯亮蓝G250(R250)具有红色和蓝色两种色调。在酸性溶液中,其以游离态存在呈棕红色;当它与蛋白质通过疏水作用结合后变为蓝色。

4. 双缩脲反应:在碱性溶液中,含两个以上肽键的化合物都能与硫酸铜反应生成紫色。

5. 酚试剂呈色反应:磷钨酸和磷钼酸能与蛋白质中色氨酸及酪氨酸残基反应生成蓝色化合物(钼蓝)。

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